上样与电泳:将处理后的样品加入变性聚丙烯酰胺凝胶的加样孔中,进行电泳。
在分子生物学和生物化学实验中,反应缓冲液(Reaction Buffer)和ATP-Mg复合物是许多酶促反应不可或缺的组成部分。它们为酶的活性提供了理想的环境和必要的能量,确保实验反应的顺利进行。
Reaction Buffer:维持反应环境的“稳定器”
反应缓冲液是一种精心配制的溶液,用于维持酶促反应中的pH值、离子强度和缓冲能力。它通常包含以下几种关键成分:
缓冲剂:如Tris-HCl或Hepes,用于维持反应体系的pH值稳定,防止酸碱变化对酶活性的影响。
离子:如Mg²⁺、K⁺等,这些离子对许多酶的活性至关重要。例如,Mg²⁺是许多酶(如DNA聚合酶、激酶等)的必需辅因子。
还原剂:如DTT(二硫苏糖醇)或β-巯基乙醇,用于防止酶的活性位点被氧化。
稳定剂:如甘油或BSA(牛血清白蛋白),用于提高酶的稳定性和活性。
反应缓冲液的成分和浓度根据不同的酶和反应需求进行优化,以确保酶在最佳条件下工作。
ATP-Mg:提供能量的“动力源”
ATP(腺苷三磷酸)是细胞内主要的能量货币,许多酶促反应需要ATP提供能量。
这种特性使得该蛋白在实验中能够高效地与其他分子相互作用,便于研究人员进行深入的分子间相互作用研究。
T7 Endonuclease I(T7EI)是一种来源于T7噬菌体的核酸内切酶,能够特异性识别并切割DNA中的错配碱基对、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA以及异源双链DNA。这种酶在基因编辑领域,尤其是CRISPR-Cas9技术中,被广泛用于检测基因突变和编辑效率。
功能与特性
错配识别:T7EI能够识别DNA中的不完全配对碱基对,并在错配位点的5'端切割第一、第二或第三个磷酸二酯键。
高特异性:该酶对特定DNA结构具有高度特异性,能够有效区分野生型和突变型DNA。
应用广泛:除了用于基因编辑效果的检测,T7EI还可用于分解四方向交叉DNA、检测或切割异源双链DNA、随机切割线性DNA进行shot-gun克隆。
在CRISPR基因编辑中的应用
在CRISPR-Cas9基因编辑中,T7EI常用于检测目标基因是否成功引入突变。具体步骤如下:
PCR扩增:分别以野生型和突变型DNA为模板,扩增包含突变位点的DNA片段。
变性与退火:将PCR产物变性后退火,形成异源双链DNA。
酶切反应:加入T7EI,在37℃下反应15-30分钟,通过琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果。
它可以用于评估抗菌药物的效果,以及探索与感染相关的疾病模型。
重组小鼠单核细胞趋化因子诱导蛋白(Recombinant Mouse MIG,也称 CXCL9)是一种重要的趋化因子,在免疫调节和炎症反应中发挥着关键作用。它通过调节免疫细胞的迁移和活性,影响免疫反应的类型和强度,是免疫学研究中的重要工具。
MIG 的结构与功能
MIG 是一种单链多肽,分子量约为10kDa。重组小鼠 MIG 通过基因工程技术生产,具有高度的纯度和生物活性。它属于 CXC 趋化因子家族,主要通过与 CXCR3 受体结合,调节免疫细胞的趋化性和功能。
在免疫调节中的作用
MIG 在免疫调节中发挥着多种重要作用。它能够吸引 T 细胞和自然杀伤(NK)细胞向炎症部位迁移,增强免疫反应的强度。此外,MIG 还能够调节巨噬细胞的活性,促进炎症因子的释放,增强免疫反应的整体效率。研究表明,MIG 在维持免疫系统的稳态和调节免疫反应的平衡方面具有不可替代的作用。
在炎症反应中的作用
MIG 在炎症反应中也发挥着关键作用。它能够促进炎症细胞的募集和活化,特别是促进 T 细胞和 NK 细胞的浸润,从而加重炎症症状。

Probe qPCR Mix 采用快速反应体系,能够在短时间内完成扩增反应,大大提高了实验速度
在分子生物学的微观世界中,T7 RNA聚合酶宛如一位技艺高超的“分子工程师”,以其独特的功能和卓越的性能,推动着基因转录的高效进行。
T7 RNA聚合酶来源于T7噬菌体,是一种单亚基酶。它结构简单,却拥有惊人的转录效率。与细胞内的多亚基RNA聚合酶相比,T7 RNA聚合酶无需复杂的组装和调控,就能迅速启动转录过程。它能够特异性地识别T7噬菌体的启动子序列,一旦结合,便如同被按下启动键,快速而准确地合成RNA分子。
这种酶的高效性源于其独特的催化机制。它在转录过程中能够稳定地结合模板DNA,减少滑动和脱落的概率,从而保证了RNA合成的连续性和准确性。T7 RNA聚合酶不仅在噬菌体的生命周期中发挥着关键作用,还在生物技术领域大放异彩。科学家们利用它开发出了高效的体外转录系统,用于合成特定的RNA分子,如mRNA、tRNA等。这些合成的RNA可用于研究基因表达调控、蛋白质合成机制,以及开发新型的基因治疗载体。
T7 RNA聚合酶还具有很强的耐受性,能够在较宽的温度和pH范围内保持活性。这使得它在各种实验条件下都能稳定工作,成为实验室中不可或缺的工具酶。
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LL37在促进伤口愈合和组织修复方面的潜力使其成为治疗慢性伤口和炎症性疾病的新策略。
Thymosin β4(Tβ4)是一种广泛存在于人体组织中的小分子蛋白质,它在细胞修复、再生和免疫调节中发挥着重要作用。Tβ4最初是在胸腺组织中被发现的,但随后的研究表明,它在多种细胞类型中都有表达,包括免疫细胞、上皮细胞和成纤维细胞。
Tβ4的功能
Tβ4的主要功能之一是促进细胞的迁移和增殖。它通过激活细胞内的信号通路,帮助细胞在受损组织中移动和分裂,从而加速伤口愈合。此外,Tβ4还具有抗炎作用,能够减少炎症细胞的浸润和炎症因子的释放,减轻组织损伤。在免疫调节方面,Tβ4可以促进T细胞的成熟和分化,增强免疫系统的功能。
Tβ4在组织修复中的作用
在组织损伤和修复过程中,Tβ4的作用尤为显著。例如,在皮肤损伤后,Tβ4能够促进皮肤细胞的迁移和增殖,加速伤口愈合。在心脏损伤中,Tβ4能够刺激心肌细胞的再生,减少心肌梗死后的纤维化。此外,Tβ4还在神经再生中发挥作用,促进神经细胞的生长和修复,有助于神经损伤后的功能恢复。
临床应用与研究
近年来,Tβ4的临床应用逐渐受到关注。一些研究发现,Tβ4在治疗慢性伤口、心肌梗死和神经退行性疾病中具有潜在的疗效。
p53基因的突变会导致细胞对DNA损伤的响应能力下降,细胞凋亡机制受损,从而促进肿瘤的发展。
在细胞内复杂的蛋白质调控网络中,泛素化是一种关键的蛋白质修饰过程,它在蛋白质降解、细胞周期调控、信号转导等生物学过程中发挥着重要作用。重组人源泛素结合酶E2D1(Recombinant Human Ubiquitin Conjugating Enzyme E2D1,UBE2D1)作为泛素化途径中的核心成员之一,承担着将泛素从激活酶E1传递到泛素连接酶E3的重要任务,是泛素化反应的关键“传递者”。
重组人源泛素结合酶E2D1的特性
重组人源泛素结合酶E2D1(UBE2D1)是一种通过基因工程技术生产的酶,具有与天然UBE2D1相同的活性。UBE2D1能够特异性地识别并结合由E1激活的泛素。在泛素化反应的第二步中,UBE2D1通过其活性位点的半胱氨酸残基与泛素形成共价键,从而将泛素从E1转移到自身。这一过程为后续的泛素连接酶E3介导的泛素转移提供了必要的中间体。
广泛的应用
重组人源UBE2D1在分子生物学研究中具有广泛的应用。例如,在体外泛素化实验中,UBE2D1被用于研究泛素化过程中的关键步骤,帮助科学家们理解泛素从E1到E3的传递机制。
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