SYBR Green qPCR Mix (2×) 以其高灵敏度、特异性、操作简便性和广泛的应用范围
在荧光定量PCR(qPCR)实验中,探针法因其高特异性和高灵敏度而备受青睐,尤其适用于需要精确检测目标基因的实验场景。然而,某些qPCR仪器(如部分ABI系列)需要高浓度的ROX参考染料来校正孔间荧光信号的差异,以确保定量的准确性和重复性。为此,Probe qPCR Mix (2×, High ROX)应运而生,它为这些特定需求提供了完美的解决方案。
高浓度ROX的重要性
ROX参考染料在qPCR实验中扮演着关键角色,它能够校正由于仪器荧光检测系统的波动、反应体系的差异以及孔间位置的差异所导致的非特异性荧光信号。对于某些qPCR仪器,高浓度的ROX是实现精准定量的必要条件。Probe qPCR Mix (2×, High ROX)中的ROX浓度经过精确调整,能够满足这些仪器对高浓度ROX的需求,从而有效提高定量的准确性和重复性。
产品特点
优化的反应体系:Probe qPCR Mix (2×, High ROX)含有优化的反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、热启动Taq DNA聚合酶以及其他必要的成分。
Hot-Start Taq Master Mix采用了独特的热启动技术,确保Taq酶在低温下无活性
Gel-Red是一种高灵敏度、低毒性的荧光核酸染料,旨在替代传统的溴化乙锭(EB)。它具有与EB相同的光谱特性,能够在不改变现有成像系统的情况下直接替换EB。产品特性安全性高:Gel-Red是一种油性大分子(分子量>1000),难以穿透细胞膜,显著降低了细胞毒性和致突变性。灵敏度高:检测灵敏度比EB高8-10倍,尤其对小分子量DNA的检测更为灵敏。稳定性好:室温下稳定,可耐受微波加热,光稳定性强,操作无需避光。适用范围广:适用于琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳,可用于dsDNA、ssDNA和RNA的染色。使用方法胶染法(前染法):制备琼脂糖凝胶时,按1:10000的比例加入Gel-Red(例如,50 mL凝胶溶液中加入5 µL 10000×Gel-Red),混匀后倒胶。按常规方法进行电泳。泡染法(后染法):电泳后,将凝胶放入染色液中(用0.1 M NaCl溶液将Gel-Red稀释3300倍),室温振荡染色30分钟。染色液可重复使用3次,4°C或室温避光保存1周。注意事项Gel-Red对玻璃和非聚丙烯材料有亲和力,建议使用聚丙烯容器。
使用10×DNA Loading Buffer时,通常按照1:9(上样缓冲液:DNA样品)的比例混合
在分子生物学实验中,DNA凝胶电泳是一种常用的技术,用于分离和分析DNA片段。而6×DNA Loading Buffer则是这一实验中不可或缺的重要试剂。
6×DNA Loading Buffer是一种六倍浓缩的上样缓冲液,主要用于DNA凝胶电泳。它含有甘油、EDTA、溴酚蓝和二甲苯青FF等成分。其中,甘油可以增加样品的密度,使样品沉入凝胶加样孔中,防止样品漂浮;EDTA则用于螯合金属离子,防止DNA降解。溴酚蓝和二甲苯青FF作为指示剂,分别指示电泳的进程,帮助实验者判断电泳是否达到最佳分离效果。
使用6×DNA Loading Buffer时,通常按照1:5(Loading Buffer:DNA样品)的比例混合。例如,对于5μL的DNA样品,加入1μL的6×Loading Buffer,混匀后即可加样。这种缓冲液适用于多种浓度的琼脂糖凝胶,溴酚蓝在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶中的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同。

SYBR Green qPCR Mix通过比较目标基因与参考基因的Ct值,实现基因表达水平的定量分析
10 mg/ml的溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)溶液是一种常用的核酸染料,广泛应用于分子生物学实验中,尤其是在DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳检测中。
EB是一种多环芳烃荧光小分子,能够嵌入核酸的碱基对之间。当EB与双链DNA(dsDNA)结合时,荧光强度会增强约25倍,与双链RNA(dsRNA)结合时,荧光强度增强约21倍。这种特性使得EB在低浓度下(如10 µg/ml)染色后无需脱色处理,即可在紫外光下清晰观察到核酸条带。
在使用10 mg/ml EB溶液进行电泳时,通常有两种染色方法:
电泳前染色:在制胶时加入EB,使其工作浓度达到0.5 µg/ml。例如,每100 ml的琼脂糖凝胶溶液中加入5-10 µL的10 mg/ml EB溶液,混匀后倒胶。
电泳后染色:将电泳后的凝胶浸泡在含有0.5 µg/ml EB的电泳缓冲液或水中,染色15-45分钟。
需要注意的是,EB具有较强的诱变性和毒性,操作时应佩戴手套和实验服,避免直接接触皮肤。此外,EB废液应按照实验室标准进行净化处理后再丢弃,以避免环境污染。

预混液中加入UDG和dUTP,通过降解含尿嘧啶的DNA片段,防止PCR产物的交叉污染
DNA非变性加样缓冲液(2×)是一种专为非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳设计的上样缓冲液,广泛应用于DNA片段的分离和分析。该缓冲液主要由Tris、EDTA、甘油等成分组成,不含溴酚蓝,能够确保DNA在电泳过程中保持其天然结构。产品特性成分:主要包含50 mM Tris-HCl、50 mM EDTA和甘油等。密度增加:含有助沉剂,使样品密度大于电泳缓冲液,确保样品能够顺利沉入加样孔。无溴酚蓝:不含溴酚蓝,避免了溴酚蓝对DNA迁移率的潜在影响。即用型设计:2×浓缩液,使用时需稀释至1×,方便快捷。使用方法稀释缓冲液:将2×DNA非变性加样缓冲液与等体积的DNA样品混合,使最终浓度为1×。加样:将混合后的样品加入凝胶加样孔中,进行电泳。电泳条件:适用于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳电压和时间根据实验需求调整。保存与注意事项保存条件:建议在4℃保存,有效期为12个月。分装使用:如果每次使用量较小,可适当分装,避免反复冻融。个人防护:操作时需佩戴实验服和一次性手套,以确保安全。及时使用:试剂开封后应尽快使用,以保证最佳实验效果。
Probe qPCR Mix (2×) 可用于定量分析基因表达水平的变化帮助研究人员深入理解基因调控
在分子生物学和生物医学研究中,荧光定量PCR(qPCR)是一种广泛使用的高灵敏度和高特异性的基因表达分析技术。SYBR Green qPCR Mix (2×)作为一种专为qPCR设计的预混液,凭借其高效、便捷和高灵敏度的特点,成为了许多实验室的首选试剂。
SYBR Green qPCR Mix的核心优势
SYBR Green qPCR Mix (2×)是一种预配制的高浓度反应体系,专为qPCR实验设计。它含有优化的反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、SYBR Green荧光染料以及热启动Taq DNA聚合酶。SYBR Green是一种能够特异性结合双链DNA的小分子荧光染料,在qPCR过程中,随着DNA扩增产物的增加,SYBR Green发出的荧光信号也随之增强。通过实时监测荧光信号的变化,可以实现对目标基因的定量分析。
高灵敏度与特异性
SYBR Green qPCR Mix (2×)具有极高的灵敏度,能够检测到低丰度的基因表达。其优化的反应体系确保了高效的DNA扩增,即使在复杂的样本中也能获得准确的定量结果。
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