将 4S Green 加入冷却至 50-60℃的琼脂糖溶液中,使其终浓度为 1×,轻轻混合后倒胶。
分子生物学实验中,RNA凝胶电泳是一种常用的检测手段,用于分析RNA的完整性、纯度和分子量。而5×RNA Loading Buffer则是RNA电泳中不可或缺的重要试剂。
5×RNA Loading Buffer是一种5倍浓缩的上样缓冲液,专为RNA非变性凝胶电泳设计。其主要成分包括甘油、EDTA、溴酚蓝和二甲苯青FF。甘油的作用是增加样品的密度,使RNA样品能够顺利沉入凝胶加样孔中,避免漂浮。EDTA则用于螯合金属离子,防止RNA降解。溴酚蓝和二甲苯青FF作为示踪染料,能够在电泳过程中指示RNA的迁移位置。
使用时,通常将RNA样品与5×RNA Loading Buffer按4:1的体积比混合,例如4μL的RNA样品加入1μL的上样缓冲液,混匀后即可上样。这种缓冲液经过DEPC处理,确保无RNase污染,从而保护RNA样品的完整性。
5×RNA Loading Buffer适用于多种RNA电泳实验,包括非变性琼脂糖凝胶电泳和变性琼脂糖凝胶电泳。它不仅操作简便,还能有效防止RNA降解,确保电泳结果的可靠性。
在含有抑制剂的样本中SYBR Green qPCR Mix 仍能保持较高的扩增效率适用于复杂样本检测
在分子生物学和生物技术领域,T4多聚核苷酸激酶(T4 Polynucleotide Kinase,T4 PNK)是一种极为重要的工具酶,以其多功能性和高效性在核酸修饰和标记中发挥着关键作用。T4 PNK能够对DNA和RNA的5'末端进行磷酸化修饰,同时也能去除3'末端的磷酸基团,使其成为核酸研究中的“全能工匠”。
T4多聚核苷酸激酶的特性
T4多聚核苷酸激酶是一种多功能酶,具有两种主要活性:5'末端的磷酸化和3'末端的去磷酸化。5'末端的磷酸化活性使其能够将ATP上的γ-磷酸基团转移到DNA或RNA的5'末端,生成5'-磷酸末端。3'末端的去磷酸化活性则能够去除DNA或RNA末端的3'-磷酸基团,生成3'-羟基末端。这种双重活性使得T4 PNK在核酸修饰中具有广泛的应用。
广泛的应用
T4多聚核苷酸激酶在分子生物学研究中具有广泛的应用。例如,在DNA克隆实验中,T4 PNK被用于磷酸化DNA片段的5'末端,使其能够与载体进行连接。在RNA研究中,T4 PNK可以用于标记RNA的5'末端,生成用于杂交实验的标记探针。
试剂盒整合了dUTP/UDG防污染系统,通过在PCR扩增产物中掺入 dUTP,有效避免了假阳性结果
T4 RNA连接酶2截短型(突变型)是一种经过基因工程改造的酶,通过引入R55K和K227Q双点突变,显著降低了非特异性连接背景,同时保持了高效的连接活性。这种酶能够特异性地将5'端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3'末端,无需ATP参与反应。
特点
高效连接:突变型酶在保持高效连接活性的同时,减少了RNA串联或自连成环等非特异性连接问题。
无需ATP:连接反应不依赖ATP,降低了背景连接。
高纯度:经过严格测试,确保无核酸外切酶、切口酶或RNase残留。
稳定性高:在-20℃条件下可保存3年,避免反复冻融。
应用
T4 RNA连接酶2截短型(突变型)广泛应用于以下领域:
小RNA文库构建:用于二代测序(NGS)中的miRNA、siRNA和piRNA文库构建。
cDNA文库构建:将单链腺苷化引物连接至小RNA上。
链特异性cDNA文库构建:用于合成链特异性的cDNA文库。
使用方法
反应条件:在1×反应缓冲液中,25℃温育。
灭活条件:65℃加热20分钟。
反应体系:通常需要加入PEG 8000以提高连接效率。
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科学家们对BMP-7的研究不断深入,揭示了其在细胞信号传导中的复杂机制。
白细胞介素 - 11(IL - 11)是一种多功能细胞因子,在人体的免疫系统和造血过程中发挥着重要作用。它主要由成纤维细胞、内皮细胞和某些免疫细胞产生,具有调节细胞增殖、分化和存活的功能。
IL - 11 的生物学功能
IL - 11 在造血过程中具有重要的调节作用。它能够刺激骨髓中多种造血细胞的增殖和分化,特别是对巨核细胞和血小板的生成有显著的促进作用。因此,IL - 11 在治疗血小板减少症等血液疾病中具有潜在的应用价值。此外,IL - 11 还可以调节免疫细胞的功能,如增强巨噬细胞的吞噬能力,促进 T 细胞和 B 细胞的存活和增殖,从而在免疫应答中发挥重要作用。
临床研究与应用
在临床研究中,重组人 IL - 11(Human IL - 11)的应用前景备受关注。通过基因工程技术生产的重组人 IL - 11,具有与天然 IL - 11 相似的生物活性,可用于治疗多种疾病。例如,在化疗引起的血小板减少症(CIT)患者中,重组人 IL - 11 可以显著提高血小板计数,缩短血小板恢复时间,从而减少出血风险。此外,IL - 11 还在骨质疏松症的治疗中显示出潜在的应用价值。
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通过对PAP的功能和调控机制的深入研究,不仅可以帮助我们更好地理解基因表达的分子基础。
核酸内切酶VIII(Endonuclease VIII,Endo VIII)是一种具有N-糖基化酶和AP-裂解酶活性的DNA损伤修复酶,广泛应用于基因损伤修复研究。其截短体则是通过基因工程改造,删除部分氨基酸序列而获得的变体,通常用于特定的研究目的,如提高酶的稳定性或特异性。
功能与特性
N-糖基化酶活性:识别并切除双链DNA上受损的嘧啶碱基,产生脱嘌呤(AP)位点。
AP-裂解酶活性:在AP位点的3'和5'端切割磷酸二酯键,产生具有3'和5'磷酸的碱基缺口。
高纯度与稳定性:核酸内切酶VIII截短体通过重组表达获得,纯度高,无核酸外切酶、核酸内切酶和RNase残留。
热失活:75℃孵育10分钟可使酶失活。
应用场景
DNA损伤修复研究:用于模拟和修复DNA损伤,特别是在氧化损伤研究中。
单细胞凝胶电泳(彗星试验):评估细胞内和体外的氧化DNA损伤。
NGS建库:在二代测序中,特异性切除含AP位点的模板链,实现双端测序。
酶法合成DNA:释放DNA链,用于合成特定的DNA结构。
Poly(U)聚合酶可能参与了细胞内的某些RNA代谢过程,但其具体机制和生理功能仍需深入研究。
在细胞内复杂的蛋白质调控网络中,泛素化是一种关键的蛋白质修饰过程,它在蛋白质降解、细胞周期调控、信号转导等生物学过程中发挥着重要作用。泛素结合酶E2B(UBE2B)作为泛素化途径中的核心成员之一,承担着将泛素从激活酶E1传递到泛素连接酶E3的重要任务,是泛素化反应的关键“接力手”。
泛素结合酶E2B的特性
泛素结合酶E2B(UBE2B)是一种高度特异性的酶,能够特异性地识别并结合由E1激活的泛素。在泛素化反应的第二步中,UBE2B通过其活性位点的半胱氨酸残基与泛素形成共价键,从而将泛素从E1转移到自身。这一过程为后续的泛素连接酶E3介导的泛素转移提供了必要的中间体。
广泛的应用
UBE2B在分子生物学研究中具有广泛的应用。例如,在体外泛素化实验中,UBE2B被用于研究泛素化过程中的关键步骤,帮助科学家们理解泛素从E1到E3的传递机制。在细胞生物学研究中,UBE2B可用于研究蛋白质的降解途径,特别是那些通过泛素-蛋白酶体系统进行降解的蛋白质。此外,UBE2B还被用于研究细胞周期调控和信号转导过程中的蛋白质修饰。
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