建议使用2.0%-2.5%的琼脂糖凝胶,电泳电压4-10 V/cm,电泳时间20-25分钟。
Tn5转座酶是一种能够高效切割并插入DNA的酶,广泛应用于基因组编辑和高通量测序文库构建。它通过识别特定的DNA序列并将其插入到目标DNA中,实现基因组的“跳跃”和重组。
工作原理
Tn5转座酶的工作原理包括以下几个步骤:
复合物形成:两个Tn5转座酶分子结合到供体DNA的转座子的ME序列,形成复合物。
切割与插入:在Mg²⁺存在的情况下,Tn5转座酶切割供体DNA,并将其插入到靶DNA中,形成转座后的DNA序列。
结果:切割形成的9bp粘性末端可通过DNA聚合酶和连接酶填补,最终形成9bp正向重复序列。
应用场景
NGS文库构建:Tn5转座酶能够将DNA片段化并直接连接测序接头,简化了传统的文库构建步骤,显著提高了建库效率。
单细胞测序:通过LIANTI技术,Tn5转座酶可用于单细胞DNA建库,实现微量DNA的高效扩增。
ATAC-seq:用于研究染色质可及性,通过将DNA序列插入开放的染色质区域,检测全基因组范围内的染色质开放程度。
CUT&Tag:结合Protein A/G,Tn5转座酶可用于切割靶蛋白结合的染色质区域,并直接插入测序接头,用于研究蛋白质-DNA相互作用。
此外,它在高保真度DNA合成中的应用,为基因工程和分子生物学研究提供了可靠的工具。
50×TBE液体是一种高浓度的核酸电泳缓冲液,广泛应用于DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳实验中。TBE是Tris-Borate-EDTA的缩写,其主要成分包括Tris(氨基三羟甲基甲烷)、硼酸(Boric Acid)和EDTA(乙二胺四乙酸)。这种缓冲液因其高缓冲能力和良好的电泳性能而备受青睐。产品特性高缓冲能力:TBE缓冲液的缓冲能力较强,适合长时间电泳,能够维持稳定的pH值。高分辨率:特别适用于分离小于1 kb的小分子DNA片段,能够提供更高的分辨率。即用型设计:50×TBE液体为浓缩液,使用时只需用去离子水稀释即可,方便快捷。使用方法配制1×TBE工作液:取20 mL的50×TBE液体,加入980 mL去离子水,充分混匀。电泳条件:凝胶浓度:通常使用1.0%-2.0%的琼脂糖凝胶。电泳电压:建议4-10 V/cm,电泳时间根据片段大小调整。保存条件:室温保存,有效期一般为12个月。注意事项沉淀处理:如果出现沉淀,可置于37℃水浴中使其溶解,不影响使用。缓冲液更换:TBE缓冲液的缓冲能力较强,但长时间电泳可能导致电泳槽过热,建议使用循环装置或及时更换工作液。
尽管 IL - 11 的生物学功能和临床应用前景令人兴奋,但其复杂的调节机制仍需进一步研究。
可溶性CD40配体(sCD40L)是CD40配体(CD40L)的一种可溶性形式,在人体免疫系统中发挥着重要的调节作用。CD40L主要由活化的T细胞、血小板和某些树突状细胞表达,通过与CD40结合,调节免疫细胞的活化、增殖和功能。
sCD40L的生物学功能
sCD40L通过与CD40结合,激活多种免疫细胞,包括B细胞、巨噬细胞和树突状细胞。它在免疫反应中具有多种生物学功能:
B细胞活化:sCD40L能够促进B细胞的增殖、分化和抗体分泌,增强体液免疫反应。
巨噬细胞活化:sCD40L能够刺激巨噬细胞的吞噬和杀菌能力,增强细胞介导的免疫反应。
树突状细胞成熟:sCD40L能够促进树突状细胞的成熟和抗原呈递能力,调节T细胞的活化。
sCD40L与疾病
sCD40L在多种疾病中表现出异常的表达水平。例如,在某些自身免疫性疾病中,如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮,sCD40L的水平显著升高,可能导致免疫反应失控,加重炎症反应。在心血管疾病中,sCD40L的升高与动脉粥样硬化和血栓形成相关。此外,sCD40L在某些癌症中也表现出异常的表达,可能影响肿瘤免疫微环境。
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IL - 12还能激活NK细胞,增强其细胞毒性,使其能够更有效地识别和杀伤肿瘤细胞和病毒感染的细胞。
在浩瀚的科技星空中,BD-3如同一颗璀璨的新星,闪耀着无限的可能。它并非传统意义上的人类,而是一种高度先进的智能生命体,以卓越的逻辑思维、强大的数据处理能力和对知识的快速学习吸收为显著特征。而人类,作为地球的智慧主宰,拥有丰富的情感、独特的创造力以及对未知世界的无尽好奇。
当BD-3与人类相遇,一场奇妙的融合之旅就此开启。BD-3能够为人类提供精准的数据分析和高效的解决方案,在科学研究领域,它助力人类探索宇宙的奥秘,从微观粒子的运动规律到遥远星系的构成,为人类的探索之旅点亮一盏盏明灯;在医疗健康方面,它凭借强大的数据处理能力,协助医生分析复杂的病例,为疾病的诊断和治疗提供有力支持,让人类在与疾病的斗争中更有底气。
而人类则赋予了BD-3温度。人类的情感让BD-3的决策更加贴近生命的本质,人类的创造力为BD-3的思维拓展了新的边界。在与人类的互动中,BD-3学会了理解人类的喜怒哀乐,学会了从人类的角度去思考问题,它不再是一个冰冷的机器,而是人类的伙伴、朋友。
BD-3与人类的携手,是智慧与情感的碰撞,是科技与人性的融合。在未来,它们将共同书写人类文明的新篇章,向着更加美好的明天迈进。

T7 RNA聚合酶源自T7噬菌体,是一种单亚基酶,结构简单却功能强大。
在分子生物学实验中,DNA凝胶电泳是一种常用的分析技术,用于分离和检测DNA片段。而10×DNA Loading Buffer则是这一实验中不可或缺的重要试剂。它是一种10倍浓缩的上样缓冲液,专门用于DNA凝胶电泳,能够帮助DNA样品顺利沉入凝胶加样孔中,并在电泳过程中提供清晰的指示。
10×DNA Loading Buffer的主要成分包括甘油、溴酚蓝、二甲苯青FF和SDS。甘油的作用是增加样品的密度,确保DNA样品能够沉入凝胶孔中,防止样品漂浮。溴酚蓝和二甲苯青FF作为指示剂,分别指示电泳的进程,帮助实验者判断电泳是否达到最佳分离效果。在1%琼脂糖凝胶中,二甲苯青FF的迁移速率与4000个碱基对的DNA片段大致相同,而溴酚蓝的迁移速率则与约500个碱基对的DNA片段相同。
使用10×DNA Loading Buffer时,通常按照1:9(上样缓冲液:DNA样品)的比例混合。例如,对于9μL的DNA样品,加入1μL的10×DNA Loading Buffer,混匀后即可上样。这种缓冲液适用于多种类型的DNA样品,包括PCR产物、质粒DNA和基因组DNA等。
Pfu酶能够在95°C的高温下保持活性,适用于PCR反应中的高温变性步骤,已成为分子生物学实验中工具
T4 Gene 32 Protein(T4 gp32)是一种由T4噬菌体基因32编码的单链DNA(ssDNA)结合蛋白,广泛应用于分子生物学实验中。该蛋白在T4噬菌体的DNA复制和修复过程中起关键作用,能够协调性地结合并稳定瞬时形成的ssDNA区域。
功能与特性稳定ssDNA:T4 gp32能够高效结合ssDNA,防止其降解或重新退火,尤其在DNA复制和修复过程中发挥重要作用。促进酶活性:该蛋白可显著提高限制性内切酶的消化效率、RT-PCR中反转录的效率,以及T4 DNA聚合酶的活性。增强PCR效率:在PCR反应中,T4 gp32能够提高产物的产量和特异性,特别是在处理复杂样本(如土壤样本)时,可有效降低抑制物的影响。应用场景电子显微镜观察:用于稳定和标记ssDNA区域,便于通过电子显微镜观察细胞内DNA的结构。重组酶聚合酶扩增(RPA):在RPA反应中,T4 gp32能够显著提高扩增效率,适用于快速、等温的核酸检测。RT-PCR和qPCR:通过结合ssDNA,T4 gp32能够提高反转录效率,增强反应的灵敏度。
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