在分子生物学实验中,核酸电泳是检测核酸片段大小和纯度的关键技术之一。
白细胞介素-4(IL-4)是一种重要的细胞因子,在调节免疫反应中发挥着关键作用。通过在大鼠中研究IL-4,科学家们能够更好地理解其在免疫系统中的功能,并为人类相关疾病的研究提供重要参考。重组大鼠IL-4(带有组氨酸标签,His)的开发,为研究IL-4的生物学功能提供了有力的工具。
IL-4的生物学功能
IL-4主要由活化的T细胞和肥大细胞产生,对免疫系统的多种细胞具有广泛的影响。它在调节体液免疫和细胞免疫平衡中起着至关重要的作用:
促进Th2细胞分化:IL-4能够促进辅助性T细胞(Th0)向Th2细胞分化,抑制Th1细胞的发育。Th2细胞主要参与体液免疫反应,通过分泌细胞因子如IL-4、IL-5和IL-13,促进B细胞的增殖、分化和抗体的产生。
增强B细胞功能:IL-4能够直接作用于B细胞,促进其增殖和分化,增强B细胞的抗体产生能力。此外,IL-4还能诱导B细胞产生IgG1和IgE抗体,这对于过敏反应和寄生虫感染的免疫反应尤为重要。
调节巨噬细胞功能:IL-4能够抑制巨噬细胞的活性,减少其产生促炎细胞因子(如IL-1、IL-6和TNF-α),从而减轻炎症反应。
在药物研发方面,BD-3 能够实时评估药物在小鼠体内的药效和安全性,为新药的临床试验提供有力的数据支
phi29 DNA Polymerase 是一种源自 Bacillus subtilis 噬菌体 phi29 的重组酶,具有极高的过程性(processivity)和链置换活性,能够在等温条件下高效扩增DNA。这种酶还具有3'→5'外切酶(校对)活性,能够确保DNA合成的高保真性。特性与优势
高过程性:phi29 DNA Polymerase 可以合成超过70 kb的长DNA片段,无需辅助蛋白。链置换活性:强大的链置换能力使其能够在等温条件下高效扩增DNA。高保真性:3'→5'外切酶活性能够实时校正错误,确保DNA复制的高准确性。等温扩增:无需复杂的温度循环,适合快速、高效的DNA扩增。应用场景phi29 DNA Polymerase 广泛应用于多种分子生物学实验:滚环扩增(RCA):用于生成周期性DNA纳米模板,适合检测低丰度核酸。多重置换扩增(MDA):一种等温扩增技术,能够在恒定温度下进行全基因组扩增。全基因组扩增(WGA):用于从微量DNA样本中扩增全基因组,适用于单细胞测序。DNA模板制备:可用于测序的高质量DNA模板制备。
溴酚蓝和二甲苯青FF作为示踪染料,能够在电泳过程中指示RNA的迁移位置。
T4 RNA连接酶2截短型(突变型)是一种经过基因工程改造的酶,通过引入特定的氨基酸突变(如R55K和K227Q),在保持高效连接活性的同时,显著降低了RNA的非特异性连接问题。这种酶能够特异性地将5'端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3'羟基末端,无需ATP参与反应。
特点
高效连接活性:能够高效连接预腺苷化的单链DNA或RNA。
低背景连接:突变型酶减少了RNA串联或自连成环等非特异性连接问题。
无核酸酶污染:经过严格测试,确保无核酸外切酶、切口酶或RNase残留。
热稳定性高:某些突变体在较高温度(如45℃和50℃)下仍保持较高的连接活性。
应用
T4 RNA连接酶2截短型(突变型)广泛应用于以下领域:
小RNA文库构建:用于二代测序(NGS)中的miRNA文库构建。
cDNA文库构建:将单链腺苷化引物连接至小RNA上。
链特异性cDNA文库构建:用于合成链特异性的cDNA文库。
使用方法
反应条件:在1×反应缓冲液中,25℃温育。
灭活条件:65℃加热20分钟。

在使用前,需将 25×聚蔗糖凝胶上样缓冲液稀释至所需浓度(如 6× 或 5×)。
在分子生物学和生物化学研究中,磷酸酶是一类重要的酶,用于去除核酸和蛋白质末端的磷酸基团。热敏磷酸酶(Thermolabile Phosphatase)作为一种特殊的磷酸酶,因其独特的热敏感性而备受关注。它在实验中提供了精准的去磷酸化控制,成为实验室中不可或缺的工具。
热敏磷酸酶的特性
热敏磷酸酶的主要特点是其在高温下迅速失活。这种特性使得它在实验中可以被精确地控制,避免了过度去磷酸化的问题。在反应过程中,热敏磷酸酶能够在适中的温度下高效地去除磷酸基团,而在需要终止反应时,通过简单的加热步骤即可使其失活。这种精准的调控能力使其在多种实验中表现出色。
广泛的应用
热敏磷酸酶在分子生物学研究中具有广泛的应用。例如,在DNA克隆实验中,它被用于去除DNA片段的5'磷酸基团,防止片段的自身环化,从而提高克隆效率。在RNA研究中,热敏磷酸酶可以用于去除RNA末端的磷酸基团,帮助研究RNA的加工和修饰过程。此外,它还被用于蛋白质的去磷酸化研究,帮助科学家了解蛋白质的修饰状态和功能调控。
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更值得一提的是,该试剂中加入了UDG(尿嘧啶DNA糖基化酶)成分。
Taq DNA连接酶是一种来源于嗜热菌(Thermus aquaticus)的耐高温DNA连接酶,能够催化与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5'-磷酸和3'-羟基之间形成磷酸二酯键。这种连接反应仅在两条寡核苷酸链与互补靶DNA完全配对且无间隙的条件下才会发生。
工作原理
Taq DNA连接酶以NAD⁺作为辅因子,在37℃至75℃的高温条件下表现出高效的连接活性。它特别适合用于连接具有较长黏性末端的DNA片段,例如12碱基对的突出末端,但对4碱基末端的连接效率较低。
特点
耐高温:在高温(37℃至75℃)条件下具有高活性,适合高温反应。
高特异性:连接反应仅在寡核苷酸链与靶DNA完全配对时发生,可用于检测单碱基替换。
高保真性:经过改造的高保真Taq DNA连接酶(HiFi Taq DNA Ligase)进一步降低了错配连接率,提高了诊断的准确性。
应用
Taq DNA连接酶广泛应用于以下领域:
分子诊断:用于连接酶检测反应(LDR)和多重连接依赖式探针扩增(MLPA),检测基因组中的单核苷酸多态性(SNP)和拷贝数变异(CNV)。
因此,该缓冲液不仅适用于常规的DNA电泳,还特别适合用于终止酶促反应后的样品分析。
在分子生物学实验中,DNA合成是许多关键技术的核心,而dNTP Set Solution(脱氧核糖核苷三磷酸溶液套装)则是实现精准DNA合成的必备工具。dNTP Set Solution包含四种脱氧核苷三磷酸(dATP、dCTP、dTTP、dGTP),每种浓度均为100 mM,为各种需要DNA合成的实验提供了强大支持。
DNA合成是生命科学中最基本的生物化学过程之一,无论是PCR扩增、基因克隆还是DNA测序,都离不开dNTPs的参与。dNTP Set Solution中的四种脱氧核苷三磷酸是DNA合成的基本单元,它们在DNA聚合酶的作用下,按照碱基互补配对原则嵌入到新合成的DNA链中。每种dNTP的高浓度(100 mM)设计确保了在反应过程中有足够的原料供应,从而提高反应的效率和灵敏度。
dNTP Set Solution的高纯度和高浓度特性使其在多种实验中表现出色。例如,在PCR反应中,准确的dNTP浓度对于反应的特异性和准确性至关重要。dNTP Set Solution能够确保四种dNTP的比例一致,避免因某一种dNTP过量或不足而导致的扩增偏差。
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