6×聚蔗糖凝胶上样缓冲液 III 是核酸电泳实验中的重要工具,其高效、稳定且操作简便的特性。
T4 RNA连接酶2截短型(突变型)是一种经过基因工程改造的酶,通过引入特定的氨基酸突变(如R55K和K227Q),在保持高效连接活性的同时,显著降低了RNA的非特异性连接问题。这种酶能够特异性地将5'端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3'羟基末端,无需ATP参与反应。
特点
高效连接活性:能够高效连接预腺苷化的单链DNA或RNA。
低背景连接:突变型酶减少了RNA串联或自连成环等非特异性连接问题。
无核酸酶污染:经过严格测试,确保无核酸外切酶、切口酶或RNase残留。
热稳定性高:某些突变体在较高温度(如45℃和50℃)下仍保持较高的连接活性。
应用
T4 RNA连接酶2截短型(突变型)广泛应用于以下领域:
小RNA文库构建:用于二代测序(NGS)中的miRNA文库构建。
cDNA文库构建:将单链腺苷化引物连接至小RNA上。
链特异性cDNA文库构建:用于合成链特异性的cDNA文库。
使用方法
反应条件:在1×反应缓冲液中,25℃温育。
灭活条件:65℃加热20分钟。
4S Green Plus 的储存条件为2-8℃,使用时需遵循实验室安全操作规程,避免直接接触皮肤。
phi29 DNA Polymerase 是一种来源于 Bacillus subtilis 噬菌体 phi29 的重组酶,经过基因工程改造后,具有卓越的链置换和持续合成能力。它能够在等温条件下高效扩增DNA,生成长达70 kb的DNA片段。
特性与优势
高持续合成能力:phi29 DNA Polymerase 可以连续合成超过70 kb的DNA片段,无需从模板上解离。
高保真性:具有3′→5′外切酶校正活性,保真性比Taq DNA Polymerase高100倍。
链置换活性:能够高效置换DNA链,适合滚环扩增(RCA)和多重置换扩增(MDA)。
温和反应条件:反应温度通常为37-42℃,适合等温扩增。
应用场景
全基因组扩增(WGA):用于单细胞测序、病原微生物检测和宏基因组研究。
滚环扩增(RCA):生成周期性DNA纳米模板,适用于测序模板制备。
多重置换扩增(MDA):用于无偏扩增全基因组。
高GC含量模板扩增:在NGS测序中,能够提升高GC含量和复杂模板的扩增效率。
使用方法
储存条件:-20℃保存,避免反复冻融。
反应条件:37-42℃孵育1-3小时,65℃加热10分钟失活。
在使用前,需将 25×聚蔗糖凝胶上样缓冲液稀释至所需浓度(如 6× 或 5×)。
2× DNA/RNA变性上样缓冲液是一种专为核酸电泳设计的浓缩缓冲液,广泛应用于DNA和RNA的变性凝胶电泳。它通过变性处理,确保核酸在电泳过程中以单链形式迁移,从而实现更清晰的分离效果。
组成成分
2× DNA/RNA变性上样缓冲液的主要成分包括:
甲酰胺:用于变性核酸,确保核酸在电泳中以单链形式迁移。
溴酚蓝和二甲苯青:作为电泳指示剂,便于观察电泳进程。
SDS:一种阴离子表面活性剂,有助于核酸的变性。
EDTA:螯合金属离子,防止核酸降解。
使用方法
样品混合:将DNA或RNA样品与2×变性上样缓冲液按1:1的比例混合,使最终浓度为1×。
变性处理:将混合后的样品在95℃加热5分钟,然后迅速冷却至冰上。
上样:将处理后的样品加入凝胶加样孔中。
电泳:在适当的电压下进行电泳,直至指示剂迁移至凝胶的合适位置。
优势
高效变性:确保核酸在电泳过程中以单链形式迁移,提高分离效果。
清晰指示:溴酚蓝和二甲苯青作为指示剂,便于实时观察电泳进程。
高纯度:无RNase污染,确保RNA样品的完整性。
适用范围广:适用于DNA和RNA的变性电泳,包括琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。
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二甲苯青和溴酚蓝的迁移速度不同,分别对应不同大小的 DNA 片段,可提供更准确的电泳进程指示。
Bsu DNA Polymerase (Large Fragment) 是一种经过基因工程改造的酶,来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的DNA聚合酶I。通过删除其5′→3′核酸外切酶结构域,保留了5′→3′聚合酶活性,同时去除了3′→5′和5′→3′核酸外切酶活性。特性与优势
链置换活性:该酶具有强大的链置换能力,能够在等温条件下高效扩增DNA。
高活性:在25℃时仍保留50%的DNA聚合酶活性,是相同温度下Klenow片段(3′→5′ exo-)活力的两倍。温和反应条件:最佳反应温度为37℃,适合在较低温度下进行等温扩增。高纯度:不含DNA内切酶、外切酶和核糖核酸酶,确保反应的特异性和可靠性。应用场景Bsu DNA Polymerase (Large Fragment) 广泛应用于以下领域:重组酶聚合酶扩增(RPA):常用于等温扩增,适合快速、灵敏的病原体检测。DNA合成:可用于cDNA第二条链的合成、随机引物法标记以及单个dA的加尾。链置换反应:在需要置换DNA链的实验中表现出色。
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牛痘DNA拓扑异构酶I具有解旋超螺旋DNA的能力,可将超螺旋DNA转化为松弛的双链环状DNA。
全能核酸酶(Benzonase Nuclease)是一种源自粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的重组核酸内切酶,经过基因工程改造,能够高效降解所有形式的DNA和RNA,包括单链、双链、线状、环状和超螺旋结构。这种酶因其广泛的核酸降解能力和高效性,被广泛应用于生物制药和基础科研领域。
特性与优势
广谱降解能力:无差别切割所有形式的DNA和RNA,将其降解为2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。
高活性与稳定性:在多种条件下(如高盐、高尿素、SDS等)仍保持高效活性。
无蛋白酶活性:不具有蛋白水解活性,不会对蛋白质样品造成损伤。
高纯度:通过基因工程在大肠杆菌中表达纯化,纯度超过99%,无内毒素污染。
应用场景
去除核酸污染:在蛋白纯化过程中,全能核酸酶可有效去除核酸污染,降低溶液粘度,提高蛋白提取效率。
细胞裂解液处理:在细胞裂解后,全能核酸酶能够降解释放的核酸,减少溶液粘度,便于后续操作。
疫苗和病毒样品制备:用于去除疫苗和病毒样品中的DNA污染,确保生物制品的安全性和功效。
Phusion Master Mix (2×) (With Dye) 高保真性,快速扩展
RNA纯化磁珠是一种基于磁珠分离技术的高效工具,广泛应用于从生物样本中提取和纯化RNA。其核心原理是利用磁珠表面修饰的特殊官能团(如硅羟基),在特定条件下与RNA特异性结合,通过磁场分离和洗涤步骤,最终获得高纯度的RNA。
工作原理
RNA纯化磁珠的表面修饰有硅羟基等官能团。在高盐、低pH值的缓冲液环境中,RNA的磷酸基团带负电,与磁珠表面的硅羟基发生静电吸附和氢键作用,从而实现特异性结合。随后,通过磁场将磁珠与溶液分离,去除含有蛋白质、多糖、细胞碎片等杂质的上清液。最后,使用低盐、高pH值的洗脱液(如无RNA酶水或TE缓冲液)处理磁珠-RNA复合物,破坏二者间的静电吸附和氢键,从而洗脱RNA。
优势
高纯度:磁珠能特异性吸附RNA,有效去除蛋白质、多糖等杂质,确保RNA的高纯度。
高回收率:磁珠对RNA的吸附能力强,能高效回收核酸,减少损失。
操作简便:整个提取过程简单,可通过自动化设备完成,降低操作难度和工作量。
安全无毒:不使用传统提取方法中的有毒试剂(如酚、氯仿),对操作人员和环境更友好。
可重复性好:提取过程稳定,受人为因素影响小,实验结果重复性高。
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