4S Green 核酸染色剂广泛应用于琼脂糖凝胶电泳中的双链 DNA、单链 DNA 和 RNA 的检
phi29 DNA Polymerase 是一种来源于 Bacillus subtilis 噬菌体 phi29 的重组酶,经过基因工程改造后,具有卓越的链置换和持续合成能力。它能够在等温条件下高效扩增DNA,生成长达70 kb的DNA片段。
特性与优势
高持续合成能力:phi29 DNA Polymerase 可以连续合成超过70 kb的DNA片段,无需从模板上解离。
高保真性:具有3′→5′外切酶校正活性,保真性比Taq DNA Polymerase高100倍。
链置换活性:能够高效置换DNA链,适合滚环扩增(RCA)和多重置换扩增(MDA)。
温和反应条件:反应温度通常为37-42℃,适合等温扩增。
应用场景
全基因组扩增(WGA):用于单细胞测序、病原微生物检测和宏基因组研究。
滚环扩增(RCA):生成周期性DNA纳米模板,适用于测序模板制备。
多重置换扩增(MDA):用于无偏扩增全基因组。
高GC含量模板扩增:在NGS测序中,能够提升高GC含量和复杂模板的扩增效率。
使用方法
储存条件:-20℃保存,避免反复冻融。
反应条件:37-42℃孵育1-3小时,65℃加热10分钟失活。
EB具有较强的诱变性和毒性,操作时应佩戴手套和实验服,避免直接接触皮肤。
Taq DNA连接酶是一种来源于嗜热菌(Thermus aquaticus)的耐高温DNA连接酶,能够催化与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5'-磷酸和3'-羟基之间形成磷酸二酯键。这种连接反应仅在两条寡核苷酸链与互补靶DNA完全配对且无间隙的条件下才会发生。
工作原理
Taq DNA连接酶以NAD⁺作为辅因子,在37℃至75℃的高温条件下表现出高效的连接活性。它特别适合用于连接具有较长黏性末端的DNA片段,例如12碱基对的突出末端,但对4碱基末端的连接效率较低。
特点
耐高温:在高温(37℃至75℃)条件下具有高活性,适合高温反应。
高特异性:连接反应仅在寡核苷酸链与靶DNA完全配对时发生,可用于检测单碱基替换。
高保真性:经过改造的高保真Taq DNA连接酶(HiFi Taq DNA Ligase)进一步降低了错配连接率,提高了诊断的准确性。
应用
Taq DNA连接酶广泛应用于以下领域:
分子诊断:用于连接酶检测反应(LDR)和多重连接依赖式探针扩增(MLPA),检测基因组中的单核苷酸多态性(SNP)和拷贝数变异(CNV)。
在非洲猪瘟病毒(ASFV)检测中,该产品凭借其高灵敏度和防污染特性,能够快速、准确地检测低浓度病毒
一步法sgRNA合成试剂盒是一种基于体外转录技术的工具,专门用于快速、高效地合成CRISPR/Cas9系统所需的单导向RNA(sgRNA)。sgRNA是CRISPR基因编辑中的关键组分,它通过引导Cas9核酸酶到达特定的基因组位点,实现精准的DNA切割。
工作原理
该试剂盒利用T7 RNA聚合酶进行体外转录,通过合成的单链DNA模板(oligo)直接生成sgRNA。这种方法操作简单、快速,适合高通量实验。用户仅需设计并合成一条含有特定靶标序列的oligo,试剂盒提供的其他组分(如T7 RNA聚合酶、NTP混合物等)可完成sgRNA的合成。
优势
高产量:单次反应可在4小时内生成50-80μg的sgRNA,满足基因编辑的需求。
高纯度:合成的sgRNA纯度高,条带单一,可有效减少脱靶效应。
高效性:合成的sgRNA能够高效引导Cas9蛋白在特定位点切割DNA,确保基因编辑的高效率。
操作简便:仅需一步反应即可完成sgRNA的合成,适合快速实验。
应用
一步法sgRNA合成试剂盒广泛应用于基因编辑研究,包括基础生物学研究、疾病模型构建和基因治疗等。
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该缓冲液主要用于核酸(DNA 和 RNA)的琼脂糖凝胶电泳,适用于多种核酸样品的分析和检测。
T4 RNA连接酶2截短型(突变型)是一种经过基因工程改造的酶,通过引入R55K和K227Q双点突变,显著降低了非特异性连接背景,同时保持了高效的连接活性。这种酶能够特异性地将5'端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3'末端,无需ATP参与反应。
特点
高效连接:突变型酶在保持高效连接活性的同时,减少了RNA串联或自连成环等非特异性连接问题。
无需ATP:连接反应不依赖ATP,降低了背景连接。
高纯度:经过严格测试,确保无核酸外切酶、切口酶或RNase残留。
稳定性高:在-20℃条件下可保存3年,避免反复冻融。
应用
T4 RNA连接酶2截短型(突变型)广泛应用于以下领域:
小RNA文库构建:用于二代测序(NGS)中的miRNA、siRNA和piRNA文库构建。
cDNA文库构建:将单链腺苷化引物连接至小RNA上。
链特异性cDNA文库构建:用于合成链特异性的cDNA文库。
使用方法
反应条件:在1×反应缓冲液中,25℃温育。
灭活条件:65℃加热20分钟。
反应体系:通常需要加入PEG 8000以提高连接效率。
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它不仅提高了实验的准确性和可靠性,还为科研人员提供了便捷的操作体验。
大肠杆菌DNA连接酶(E. coli DNA Ligase)是一种在分子生物学中广泛应用的酶,最初于1967年在大肠杆菌中被发现。它能够催化DNA链的5'-磷酸和3'-羟基末端形成磷酸二酯键,从而连接相邻的DNA片段。
工作原理
大肠杆菌DNA连接酶通过NAD⁺作为辅酶,提供能量来完成连接反应。它主要作用于具有黏性末端的DNA片段,但连接平末端的效率较低。该酶在DNA复制、修复和重组过程中发挥重要作用,特别是在DNA聚合酶Ⅰ填满单链缺口后,封闭DNA双链上的缺口。
应用
大肠杆菌DNA连接酶广泛应用于分子克隆和基因工程中。它常用于连接由限制性内切酶切割产生的黏性末端DNA片段,是构建重组DNA分子的关键步骤。此外,它还被用于cDNA克隆等特定应用中。
优势与特点
专一性:大肠杆菌DNA连接酶主要作用于黏性末端,连接效率高。
依赖NAD⁺:与T4 DNA连接酶不同,它需要NAD⁺作为辅酶,而不是ATP。
热失活:该酶可以通过65℃加热20分钟失活,便于后续实验操作。
大肠杆菌DNA连接酶凭借其高效性和专一性,已成为分子生物学实验中的重要工具,尤其在需要高特异性的连接反应中表现出色。
在分子生物学实验中,RNA凝胶电泳是一种常用的检测手段,用于分析RNA的完整性。
在分子生物学和生物化学研究中,DNA合成是一个核心过程,而dITP(脱氧肌苷三磷酸)作为一种特殊的核苷酸,为DNA合成提供了独特的可能性。dITP, 100 mM Solution是一种高浓度的脱氧肌苷三磷酸溶液,它在某些特定的实验中发挥着不可替代的作用。dITP的独特性质dITP是一种含有肌苷(Inosine)的脱氧核苷三磷酸。肌苷是一种次黄嘌呤核苷,其碱基部分与腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)都能形成稳定的碱基配对。这种特性使得dITP在DNA合成中具有独特的应用价值。例如,在某些需要引入“通用碱基”的实验中,dITP可以替代传统的dATP或dGTP,从而增加DNA合成的灵活性和通用性。应用场景dITP, 100 mM Solution在以下几种实验中表现出色:通用引物设计:在某些需要设计通用引物的实验中,dITP可以替代传统的dATP或dGTP。由于肌苷能够与A和G配对,这种引物可以与多种模板序列结合,从而提高引物的通用性和适用范围。DNA标记:在DNA标记实验中,dITP可以用于引入特定的标记基团。例如,通过化学修饰将荧光基团或生物素连接到肌苷上,从而实现对DNA的特异性
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