dNTP/dUTP Mixture 与尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)联合使用可有效降解含dU的假阳性
在分子生物学研究中,长片段DNA扩增是许多实验的关键步骤,但传统PCR方法在扩增较长片段时常常面临效率低、特异性差等问题。Ultra-Long Master Mix (2×) (Without Dye)的出现,为这一难题提供了高效的解决方案。
Ultra-Long Master Mix (2×) (Without Dye)是一种专为长片段DNA扩增设计的预混反应体系。它以Ultra-Long DNA Polymerase为核心,这种聚合酶融合了多种酶的特性,能够在单次反应中高效扩增长达40 kb甚至更长的DNA片段。这种能力使其在基因组学研究、全基因合成以及复杂基因组区域的分析中具有无可比拟的优势。
该Master Mix的“2×”浓度设计意味着实验人员只需将模板DNA、引物和水加入其中,即可快速配制好反应体系。这种预混液不仅简化了操作流程,还减少了人为误差,确保了反应体系的均一性和稳定性。此外,无染料配方为后续实验提供了更大的灵活性。实验人员可以根据需要选择是否添加染料,或者直接用于下游应用,如克隆、测序或无染料的凝胶电泳分析。
在分子生物学实验中,核酸电泳是检测核酸片段大小和纯度的关键技术之一。
在荧光定量PCR(qPCR)实验中,准确性和重复性是实验成功的关键。然而,实验室中的PCR产物污染可能导致假阳性结果,严重影响实验的可靠性。SYBR Green qPCR Mix (2×, UDG Plus)通过整合尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)技术,提供了一种高效、防污染的qPCR解决方案,确保实验结果的准确性和可靠性。
UDG技术的防污染机制
SYBR Green qPCR Mix (2×, UDG Plus)的核心优势在于其整合了UDG技术。UDG能够特异性识别并降解含有尿嘧啶(U)的DNA,从而防止实验室中残留的PCR产物污染。在qPCR反应开始前,UDG会降解引物或模板中的尿嘧啶,防止非特异性扩增。而在高温变性步骤中(通常95℃),UDG会迅速失活,不会影响后续的qPCR反应。
产品特点
高效防污染:UDG技术能够有效降解含有尿嘧啶的PCR产物,防止实验室中的残留产物污染,从而减少假阳性结果。
dNTP Mix是不可或缺的关键试剂,广泛应用于PCR扩增、cDNA合成、DNA测序、引物延伸反应等
Tris-硼酸电泳缓冲液(10×TBE)是一种高浓度的缓冲液,广泛应用于核酸电泳实验中,特别适用于DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳。它由Tris、硼酸和EDTA组成,具有强大的缓冲能力,能够维持稳定的pH值,从而提高电泳的分辨率。产品特性成分:主要由900 mM Tris-硼酸和20 mM EDTA组成。工作液浓度:稀释10倍后得到的1×TBE工作液含有90 mM Tris-硼酸和2 mM EDTApH值约为8.0。缓冲能力强:适合较长时间电泳,能够维持稳定的pH值,不易出现pH波动。高分辨率:特别适用于分离小于1 kb的DNA片段,能够提供清晰的条带。保存条件:室温保存,有效期长达12个月。使用方法稀释:将10×TBE缓冲液用蒸馏水或去离子水稀释10倍,制备1×工作液。电泳操作:将稀释后的1×TBE缓冲液加入电泳槽中,确保缓冲液完全覆盖凝胶。加样后开始电泳,电泳条件根据实验需求调整。染色与观察:电泳结束后,使用合适的核酸染料(如EB或Goldview)染色。在紫外灯下观察核酸条带。
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4S Green 核酸染色剂广泛应用于琼脂糖凝胶电泳中的双链 DNA、单链 DNA 和 RNA 的检
在分子生物学实验中,长片段DNA的扩增一直是PCR技术的重要挑战。Ultra-Long Master Mix (2×) (With Dye)凭借其卓越的长片段扩增能力和预混染料的便捷性,成为了这一领域的理想选择。
Ultra-Long Master Mix (2×) (With Dye)是一种专为长片段DNA扩增设计的预混反应体系,其核心成分为Ultra-Long DNA Polymerase。这种聚合酶融合了多种酶的特性,能够在单次反应中高效扩增长达40 kb甚至更长的DNA片段。这种能力使其在基因组学研究、全基因合成以及复杂基因组区域的分析中具有无可比拟的优势。
与无染料版本不同,Ultra-Long Master Mix (2×) (With Dye)在配方中加入了预混染料。这种设计使得实验人员在完成PCR反应后可以直接进行凝胶电泳分析,无需额外添加上样缓冲液。预混染料不仅节省了操作步骤,还减少了因手动添加缓冲液而导致的误差,提高了实验的重复性和可靠性。此外,染料的加入也便于实验人员在电泳过程中实时观察扩增产物的迁移情况,从而更直观地评估PCR反应的效果。
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通常将 1 μL 的 6×聚蔗糖凝胶上样缓冲液 III 与 5 μL 的核酸样品混合。
T4 UvsX Recombinase是一种来源于T4噬菌体的重组酶,属于RecA/Rad51家族的同源体,广泛应用于重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)技术中。该酶能够与单链DNA(ssDNA)结合并形成核酸蛋白复合物,通过寻找与双链DNA(dsDNA)的同源序列进行链置换反应,从而实现等温条件下的高效DNA扩增。产品特性高效结合与置换:T4 UvsX Recombinase能够稳定ssDNA,并在dsDNA中寻找同源序列,完成链置换反应。无核酸酶活性:该酶本身不具有核酸酶活性,不会降解DNA。温和反应条件:可在37-42℃的等温条件下进行反应,适合快速、灵敏的核酸扩增。应用场景T4 UvsX Recombinase是RPA技术的核心组分之一,广泛应用于以下领域:病原体检测:可用于检测多种DNA和RNA病原体,如中东呼吸综合征(MERS)、HIV-1、埃博拉病毒和COVID-19,检测下限通常低于100个拷贝。即时诊断(POCT):因其快速、简便的特点,非常适合现场快速诊断试剂的开发。
SYBR多次冻融实验中表现出良好的稳定性,即使经过20次冻融,其扩增性能与对照组相比无显著差异
在分子生物学实验中,DNA合成是许多关键技术的核心,而dNTP Set Solution(脱氧核糖核苷三磷酸溶液套装)则是实现精准DNA合成的必备工具。dNTP Set Solution包含四种脱氧核苷三磷酸(dATP、dCTP、dTTP、dGTP),每种浓度均为100 mM,为各种需要DNA合成的实验提供了强大支持。
DNA合成是生命科学中最基本的生物化学过程之一,无论是PCR扩增、基因克隆还是DNA测序,都离不开dNTPs的参与。dNTP Set Solution中的四种脱氧核苷三磷酸是DNA合成的基本单元,它们在DNA聚合酶的作用下,按照碱基互补配对原则嵌入到新合成的DNA链中。每种dNTP的高浓度(100 mM)设计确保了在反应过程中有足够的原料供应,从而提高反应的效率和灵敏度。
dNTP Set Solution的高纯度和高浓度特性使其在多种实验中表现出色。例如,在PCR反应中,准确的dNTP浓度对于反应的特异性和准确性至关重要。dNTP Set Solution能够确保四种dNTP的比例一致,避免因某一种dNTP过量或不足而导致的扩增偏差。
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